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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
本品為使用大腸桿菌 DH5α 菌株制備的高效化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣
泛用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。
產(chǎn)品組成
組分
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型： F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk- , mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96
relA1 λ-
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產(chǎn)品特性
-該菌株的重組率較低，故常用于克隆質(zhì)粒的保存；
-藍白斑篩選時，需在平板上預(yù)先涂布 IPTG 和 X-gal；
-屬于 E. coli K12 系列，可用于基因克隆等；不可用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統(tǒng)的蛋白表達。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預(yù)熱），然后置于37 ℃搖床復(fù)壯45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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