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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
大腸桿菌 DH10B T1 中的 tonA 突變賦予了該菌對噬菌體 T1 和 T5 的抗性，可以保護(hù)寶貴的文庫免
受污染。此外，甲基化依賴的限制系統(tǒng)(mcrA、mcrBC 和 mrr)的突變使 DH10B T1 成為構(gòu)建原核和
真核基因組文庫的理想選擇。該菌株還具有 ΔlacZM15 基因型，因此可以在含有 X-Gal 的平板上進(jìn)
行藍(lán)/白篩選。該菌株的化學(xué)感受態(tài)效率不高，常使用電轉(zhuǎn)化感受態(tài)；經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，
DH10B T1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率達(dá) 107 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
DH10B T1
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ-
rpsL nupG tonA
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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