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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
BW25113 菌株來源于 E. coli K12 W1485，是 K12 的衍生菌株，與 MG1655 類似，也是一種經(jīng)過較
少改造，比較接近于“野生型"的大腸桿菌工程菌株。BW25113 作為母系菌株，可以用來制作 E. coli
Keio Knockout 文庫；同時可作為大腸桿菌模式菌株使用，用來制作各種基因的 Knockout 突變體。
另外，BW25113 可用于構(gòu)建、擴增質(zhì)粒使用，但是不含核酸酶 endA1 突變，因此體內(nèi)核酸酶含量
較高，提取質(zhì)粒時務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取的質(zhì)粒被降解。
BW25113 感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
BW25113 感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F-, DE(araD-araB)567, lacZ4787(del)::rrnB-3, LAM-, rph-1, DE(rhaD-rhaB)568, hsdR514
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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