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應(yīng)用領(lǐng)域	生物產(chǎn)業(yè),綜合

GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品信息：

組成 BC304-01
GV3101 Chemically Competent cells 20×100μl
pCAMBIA2301（100ng/μl） 1 支
儲(chǔ)存條件：-70 ℃ 保存，避免反復(fù)凍融
基因型：
C58 (rif R ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR /strep R ) Nopaline
GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品介紹：

GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——抗性基因Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90(pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：Strep和Gent，賦予GV3101菌株*霉素和抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng)植物雙元pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)103cfu/μg，-70℃保存12個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

轉(zhuǎn)化方法：
（采用凍融方法）：
1. 取-70℃保存的于冰水浴中融化
2. 無(wú)菌條件下，向感受態(tài)細(xì)胞中加入 100ng-1μg 質(zhì)粒 DNA（次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的
量），輕輕混勻，冰水浴中靜置 5 分鐘
3. 將離心管置于液氮中速凍 5 分鐘；（注：也可以用干冰和無(wú)水乙醇混合物代替液氮）
4. 然后快速將離心管置于 37℃水浴中保持 5 分鐘，不要晃動(dòng)水面
5. 將離心管放回冰水浴中，冰浴 5 分鐘
6. 無(wú)菌條件下加入 800μl 無(wú)抗生素的 2xYT 或 LB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)，菌體復(fù)蘇
7. 6000rpm 離心 1 分鐘收菌，留 100μl 左右上清，輕輕吹打重懸菌體，取適量菌液，涂布于相應(yīng)抗生素的LB 平板上，于 28℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 48-72 小時(shí)
（當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí)，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時(shí)加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28℃
培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 h）
注意事項(xiàng)：
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降
質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量
4. 濃度不應(yīng)高于 25 μg/ml，過(guò)高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入 Ti 質(zhì)粒篩選抗生素
可防止 Ti 質(zhì)粒丟失，但 Ti 質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮
這些抗生素，Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)

E 、感受態(tài)細(xì)胞
E-1 、大腸桿菌克隆感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC101-01	0 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC101-02	0 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC102-01	DH5α 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC102-02	DH5α 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC103-01	JM109 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC103-02	JM109 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC104-01	XL1-Blue 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC104-02	XL1-Blue 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC105-01	Mach 1-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC105-02	Mach 1-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC117-01	Turbo 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×10	包
BC117-02	Turbo 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC118-01	Stable 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC106-01	DH10B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC106-02	DH10B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC107-01	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC107-02	OmniMAX2-T1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC108-01	Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC115-01	Stbl4 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC109-01	XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC110-01	JM110 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC111-01	DB3. 1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC112-01	DH10BAC 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC113-01	NEB 10-beta 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC114-01	BJ5183-AD- 1 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
E-2 、大腸桿菌表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC201-01	BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC201-02	BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC202-01	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC202-02	BL21(DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC203-01	M15 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC203-02	M15 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC204-01	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC204-02	Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC205-01	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC205-02	OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC206-01	T7 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC206-02	T7 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC207-01	T7pLysY 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC207-02	T7pLysY 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC208-01	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC208-02	Shuffle T7-K12 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
BC209-01	Shuffle T7-B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×10	包
BC209-02	Shuffle T7-B 感受態(tài)細(xì)胞	100μl ×20	包
E-3 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC401-01	NEB 10-beta 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC402-01	BJ5183 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC403-01	BJ5183-AD- 1 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC404-01	0 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC405-01	DH5α 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
E-4 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC301-01	LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC302-01	AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC303-01	EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞	100ul ×20	包
BC304-01	GV3101	100ul ×20	包
E-5 、農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
BC305-01	LBA4404 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC306-01	AGL1 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受電轉(zhuǎn)態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC307-01	EHA105 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包
BC308-01	GV3101 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞	50μl ×20	包