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LM/TK[LMTK-1]小鼠

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更新時間:2025-02-12 15:22:50瀏覽次數(shù):70次

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二、 使用方法1 、您收到細胞后
二、 使用方法

1 、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時, 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液(備注: 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞, 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡 ,最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2 、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液, PBS 清洗細胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min;
3)棄上清,沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞貼壁后, 觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細胞凍存
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min;
3)用適當(dāng)量的凍存液(培養(yǎng)液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20 1h,然后將其移入-80℃過夜, 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存)。
4、細胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 ,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,然后加入 5ml 全培養(yǎng)液混勻細胞, 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3
第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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