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Nanoscope Systems lnc
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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如何對(duì)熒光共聚焦顯微鏡進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察?

時(shí)間:2023/1/9閱讀:950
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  熒光共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上,配以激光掃描裝置,通過可見光激發(fā)熒光探針,然后通過計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)獲得細(xì)胞的圖像。不僅可以觀察固定的細(xì)胞和組織切片,還可以實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察和檢測活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、分子和離子。
 
  

熒光共聚焦顯微鏡
 

 

  如何對(duì)熒光共聚焦顯微鏡進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察?
  
  1、細(xì)胞內(nèi)鈣變化的實(shí)時(shí)定量測定。
  
  2、測量細(xì)胞內(nèi)pH值的變化。
  
  激光共聚焦顯微鏡是測量多種離子濃度并顯示其分布的有效工具。聚焦信息的有效識(shí)別使得在亞細(xì)胞水平顯示離子分布成為可能。熒光探針可用于測量單個(gè)細(xì)胞中的PH值以及活細(xì)胞中各種離子(Ca+、K+、Na+、Mg2+)的濃度和變化。一般來說,電生理記錄裝置和攝像技術(shù)可以快速檢測細(xì)胞內(nèi)離子量的變化,激光共聚焦技術(shù)可以提供更好的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中Ca+濃度動(dòng)態(tài)變化的圖像,對(duì)研究Ca+的細(xì)胞內(nèi)動(dòng)力學(xué)有意義。
  
  3、檢測膜電位的變化。
  
  單體在低電位時(shí)存在,發(fā)出綠色熒光,聚集體在高電位時(shí)發(fā)出紅色熒光。隨著電位的增加,紅色熒光也增加。
  
  4、檢測細(xì)胞中活性氧的產(chǎn)生。
  
  5、藥物篩選
  
  藥物、病毒、細(xì)菌等的熒光標(biāo)記。當(dāng)檢測到藥物跨膜進(jìn)入組織或細(xì)胞時(shí),可以檢測到藥物是否進(jìn)入,其位置含量和動(dòng)態(tài)過程。
  
  6、細(xì)胞對(duì)細(xì)胞通信的研究
  
  激光共聚焦顯微鏡可以通過觀察縫隙連接分子在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)移來測量一些傳遞細(xì)胞調(diào)控信息的離子和小分子。該技術(shù)可用于研究胚胎發(fā)育、生殖發(fā)育、神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤發(fā)生等過程中縫隙連接通訊的基本機(jī)制和功能,也可用于識(shí)別對(duì)縫隙連接有潛在毒性的化學(xué)物質(zhì)。
  
  7、觀察細(xì)胞遷移和生長。
  
  熒光共聚焦顯微鏡大大提高了光子產(chǎn)生效率,樣品可以與毒性較小的染料結(jié)合,以減少每次掃描時(shí)激光束對(duì)細(xì)胞的損傷。LSCM可用于數(shù)小時(shí)的長期定時(shí)掃描,以記錄細(xì)胞遷移和生長等細(xì)胞生物學(xué)現(xiàn)象。
  
  8、熒光漂白恢復(fù)的檢測
  
  當(dāng)一個(gè)細(xì)胞中的熒光分子被激光漂白或淬滅而失去發(fā)光能力時(shí),相鄰細(xì)胞中未淬滅的熒光分子可以通過細(xì)胞間的縫隙擴(kuò)散到漂白的細(xì)胞中,從而恢復(fù)熒光。該技術(shù)可用于分析細(xì)胞生物學(xué)過程,如細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞膜上的受體流動(dòng)和大分子組裝。

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