一、TA1535Ames菌株產(chǎn)品介紹

 

　　遺傳毒性試驗(yàn)在食品、藥物、化妝品、環(huán)境等各領(lǐng)域安全檢測(cè)及評(píng)價(jià)上得到了廣泛應(yīng)用。其中比較常見的是TA1535Ames菌株試驗(yàn)，也是經(jīng)典的測(cè)試化學(xué)物或藥物致突變實(shí)驗(yàn)，該法測(cè)定主要在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，具有簡(jiǎn)單、快速、精確而又靈敏的特點(diǎn)，被世界各國(guó)廣泛采用。為了使以上試驗(yàn)條件更接近于哺乳動(dòng)物的代謝情況，在測(cè)試系統(tǒng)中加入哺乳動(dòng)物微粒體酶（S9)，可彌補(bǔ)體外試驗(yàn)缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。

 

　　齊氏生物提供的沙門氏菌株（TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535）TA1535(Ames試驗(yàn)）和WP2uvrA大腸桿菌(Ames試驗(yàn)），經(jīng)過鑒定，菌株特性與活菌數(shù)量符合Ames試驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，并以甘油菌的形式提供，融化后可直接使用。為了保證試驗(yàn)效果，建議搭配齊氏生物研發(fā)的S9代謝活化系統(tǒng)一起使用。

 

　　二、保存條件

 

　　干冰運(yùn)輸，-80℃保存。

 

　　三、TA1535Ames菌株注意事項(xiàng)

 

　　1、在使用過程中要特別注意避免培養(yǎng)基污染菌株。

 

　　2、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

 

　　3、為了您的健康和安全，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴好一次性手套進(jìn)行無菌操作。

 

　　四、鑒定項(xiàng)目

 

　　1、脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環(huán)或一端撓起的接種針以無菌操作術(shù)取各菌株的增菌培養(yǎng)液，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分別劃平行線，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條，浸濕結(jié)晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

 

　　2、R因子劃線接種，貼放濾紙條及培養(yǎng)等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同，為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外，還有pAQ1，載有抗四環(huán)素的基因，故另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上。

 

　　3、紫外線損傷修復(fù)缺陷（△uvrB）在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見光修復(fù)作用。培養(yǎng)同上。

 

　　4、自發(fā)回變預(yù)先制備底平板；向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。

 

　　5、回變特性——診斷性試驗(yàn)上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液，需活化系統(tǒng)者并加入S9mix，余同上。

 

　　6、斑點(diǎn)試驗(yàn)吸取測(cè)試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45℃左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時(shí)做溶劑對(duì)照和陽性對(duì)照，分別貼放于平板上相應(yīng)位置。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長(zhǎng)出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。

 

　　7、平板摻入試驗(yàn)將一定量樣液和0.1ml測(cè)試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。同時(shí)做陰性和陽性對(duì)照，每種處理做3個(gè)平行。試樣通常設(shè)4個(gè)～5個(gè)劑量。選擇劑量范圍開始應(yīng)大些，有陽性或可疑陽性結(jié)果時(shí)，再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應(yīng)關(guān)系。培養(yǎng)同上。同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對(duì)照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值≥2，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，背景正常，則判為致突變陽性。