植物香豆酸3-羥基化酶(C3H)ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

1.      請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.      從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3.      20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被香豆酸-3-羥基化酶（C3H）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的香豆酸-3-羥基化酶（C3H）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法：植物香豆酸3-羥基化酶(C3H)ELISA檢測(cè)試劑盒

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

（植物處理方案）

1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心ィ鐭o(wú)液氮，剪碎，玻璃勻漿器研磨也可；

2、 加入樣品體積9倍（鮮重：勻漿液體積）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 請(qǐng)于4℃ ，3000rpm，離心10min，收集上清；

4、 取上清檢測(cè)。

【樣本儲(chǔ)存】：收集樣本必須清楚檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存再4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本分裝凍存在-20℃或-80℃。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-80℃可保存6個(gè)月。

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