檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被卵黃蛋白原（VTG）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的卵黃蛋白原（VTG）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

科研魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA檢測試劑盒組成及試劑配制：（檢測范圍請參考說明書）

1. 酶標(biāo)板（Microelisa stripplate）：一塊（96孔或者48孔）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：0.3ml*6管或者0.3ml*6管

3. 稀釋液（Sample Diluent）：6ml或者3ml

4. 檢測抗體-HRP（HRP-Conjugate reagent）：10ml或者5ml

5. 20x洗滌緩沖液（20X Wash solution）：25ml或者15ml（按說明書進(jìn)行稀釋）

6. 底物A（Chromogen Solution A）：6ml或者3ml

7. 底物B（Chromogen Solution B）：6ml或者3ml

8. 終止液（Stop Solution）：6ml或者3ml

9. 封板膜（Closure plate membrane）：2張

10. 說明書（User manual）：1份

11. 自封袋（Sealed bags）：1個

實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意的試驗(yàn)規(guī)矩：

1.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)康復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
2.試驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)厲健全和履行消du隔絕原則，各種試驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
3.停止液具有腐蝕性，應(yīng)避免觸摸皮膚和衣物，如不小心觸摸請立即用很多自來水沖刷。
4.濃縮洗刷液在低溫時簡單結(jié)晶，使用時需康復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗刷時各孔均需加滿液體，避免孔口有游離酶不能洗凈。

科研魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA檢測試劑盒樣本要求：液體類標(biāo)本（血清血漿、尿液、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液、胸腹水、腦脊液等標(biāo)本）

【血清標(biāo)本】收集、處理及保存方法：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞 刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地 分離。

【血漿標(biāo)本】收集、處理及保存方法：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

【細(xì)胞培養(yǎng)上清液】收集、處理及保存方法：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

【組織勻漿】收集、處理及保存方法：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。