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檢測(cè)原理:大鼠FIX酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被(FIX)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的(FIX)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備:
1) 確定試劑盒在有效期內(nèi)
2) 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書,按說(shuō)明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)
3) 提前準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需的設(shè)備(如離心機(jī)、37℃恒溫箱、高精度加樣器及槍頭、酶標(biāo)儀等)
4) 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者注意低溫保存。根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
5) 按說(shuō)明書將所有試劑平衡至室溫,配制所需試劑。嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟。
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