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科研小鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISA檢測(cè)試劑盒性能:
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、75、150、300、600、1200 pg/mL
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1) 為了避免交叉感染,配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。
2) 混合或重溶蛋白溶液時(shí),盡量避免起沫。
3) 每次孵育時(shí),請(qǐng)使用正確的封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4) 終止液上板書匈奴應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃;若孔內(nèi)有綠色,則表明孔內(nèi)液體未混勻請(qǐng)充分混合。
科研小鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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