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檢測原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被類總黃酮(flavone)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類總黃酮(flavone)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法:植物總黃酮(flavone)ELISA檢測試劑盒
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
4. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
洗板方法:手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
植物總黃酮(flavone)ELISA檢測試劑盒注意事項:
1) 充分混勻對保證反應結果很重要,在加液后請輕輕晃動整個96板孔,以保證混勻。
2) TMB溶液請勿接觸氧化劑或金屬,否則容易失效。
3) 加樣時請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產生。
4) 檢測標準品和樣品時建議設置重復孔,以確保檢測結果的可信度。
5) 洗滌過程非常重要,洗滌不充分會下降并導致結果誤差較大。
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