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【產(chǎn)品名稱】Gibco分散酶Dispase II，粉末

【產(chǎn)品貨號(hào)】17105041

【產(chǎn)品規(guī)格】5 g

【產(chǎn)品狀態(tài)】凍干

【產(chǎn)品類型】細(xì)胞培養(yǎng)解離試劑

【產(chǎn)品效期】24個(gè)月

【產(chǎn)品運(yùn)輸】室溫

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】Gibco分散酶Dispase II，粉末是一種氨基內(nèi)肽酶，可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見(jiàn)于膠原蛋白。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用，可用于原代細(xì)胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶 II 相對(duì)溫和，在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力，通常可維持細(xì)胞膜完整性。Gibco™ 分散酶 II 在多粘芽孢桿菌中生產(chǎn)，包裝形式為凍干非無(wú)菌粉末，供細(xì)胞或組織解離等研究使用，并防止在懸浮培養(yǎng)中結(jié)團(tuán)。我們保證 Gibco™ 分散酶 II 的活性大于 0.5 單位/mg。

【產(chǎn)品使用】

重建Dispase

1.  將非無(wú)菌酶溶解在Dulbecco 's磷酸緩沖鹽水(DPBS)中，不含鈣和鎂至10 mg/mL。

2.   再用不含鈣和鎂的DPBS稀釋至終濃度0.6-2.4 U/mL。

注意:濃度不建議高于2.4 U/mL。

3.通過(guò)0.22µm的過(guò)濾膜過(guò)濾滅菌。

分離組織

1.用無(wú)菌剪刀將組織切成3-4毫米的小塊。

2.在不含鈣和鎂的無(wú)菌DPBS中清洗幾次組織片。

3.將組織片段浸入Dispase溶液(0.6-2.4 U/mL)中，37℃孵育。

4.在37°C下緩慢攪拌，直到組織充分溶解。對(duì)于致密組織，我們建議孵育1小時(shí)。即使經(jīng)過(guò)幾個(gè)小時(shí)的消毒，細(xì)胞也不會(huì)受到不良影響。

5.如有必要，通過(guò)無(wú)菌不銹鋼或尼龍網(wǎng)將分散的細(xì)胞從殘留組織中分離出來(lái)，或者在較大的碎片沉淀后簡(jiǎn)單地倒入細(xì)胞。如果需要進(jìn)一步分解，可以向剩余的組織碎片添加新鮮的Dispase溶液。

6.離心使細(xì)胞成球，倒入酶溶液。

7.將細(xì)胞顆粒重新懸浮在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。使用伯爵夫人®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器確定活細(xì)胞密度(可使用自動(dòng)或手動(dòng)替代方法)。

8.將細(xì)胞植入含有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，在預(yù)定條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

注:通過(guò)將濃度為0.3-0.6 U/mL的disase與膠原酶(60-100 U/mL)混合，可以更有效地分離組織。