目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>普通PCR檢測試劑盒>> 1499206青果染料法PCR鑒定試劑盒
| 純度 | 99% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50次/盒 | 貨號 | 1499206 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 | 主要用途 | 科研實驗 |
本產(chǎn)品僅供科研，不得做其它用途
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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗，不能用于定量。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
青果染料法PCR鑒定試劑盒樣品的制備
【試劑盒組成】
序號 | 組成 | 50T/盒 |
1 | RT-PCR反應(yīng)液 | 875 μL×1管 |
2 | 混合酶液 | 125 μL×1管 |
3 | 陽性對照 | 40 μL×1管 |
4 | C 陰性對照 | 40 μL×1管 |
5 | 說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個月。
定義和原理
PCR 探針法試劑盒是基于聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)，結(jié)合探針來檢測特定核酸序列的工具包。其原理是在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上，加入了一段能與目標核酸序列特異性結(jié)合的熒光標記探針。在 PCR 擴增過程中，當探針與目標序列結(jié)合后，通過熒光信號的變化來實時監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴增情況。
主要組成成分
探針：帶有熒光基團和淬滅基團，在完整狀態(tài)下，淬滅基團抑制熒光基團的熒光信號。當探針與目標序列結(jié)合并被核酸酶切割后，熒光基團和淬滅基團分離，從而產(chǎn)生熒光信號。
DNA 聚合酶：負責(zé)在引物的引導(dǎo)下，將脫氧核苷酸（dNTPs）逐個添加到引物的 3' 端，合成新的 DNA 鏈。
dNTPs：即脫氧核苷三磷酸，包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP，是合成 DNA 的原料。
反應(yīng)緩沖液：為 PCR 反應(yīng)提供適宜的 pH 值、離子強度等環(huán)境條件，保證 DNA 聚合酶的活性和反應(yīng)的順利進行。
常見類型
TaqMan 探針法試劑盒：TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，其 5' 端標記熒光報告基團，3' 端標記淬滅基團。在 PCR 擴增過程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會將與目標序列結(jié)合的探針切割，使熒光報告基團和淬滅基團分離，熒光信號增強。通過檢測熒光信號的強度，可以實時監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴增情況。
分子信標探針法試劑盒：分子信標是一種具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸探針，其兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團。在沒有目標序列存在時，分子信標呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)，熒光報告基團和淬滅基團靠近，熒光信號被淬滅。當存在目標序列時，分子信標與目標序列雜交，發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開，熒光報告基團和淬滅基團分離，產(chǎn)生熒光信號。
2. 樣品制備
DNA提?。菏褂眠m合的DNA提取試劑he提取待測樣品中的DNA，確保DNA的純度和完整性。
樣品處理：樣品需在0-4℃條件下處理，避免RNA降解，并在實驗后立即檢測或儲存于-20℃。
3. 反應(yīng)體系構(gòu)建
反應(yīng)管標記：根據(jù)實驗需求，標記N+9或N+4個PCR管，其中N為樣品數(shù)量，+9或+4分別用于標準曲線、陰性對照和陽性對照。
加入試劑：
每孔加入25μL反應(yīng)體系，包括模板DNA、引物、探針、dNTPs、Taq酶等。
陽性對照和陰性對照分別加入不同濃度的標準品或無DNA的溶液。
4. PCR擴增
初始變性：95℃預(yù)變性3分鐘。
循環(huán)擴增：
溫度設(shè)置：95℃（變性）15秒，60℃（退火）30秒，72℃（延伸）1分鐘。
循環(huán)次數(shù)：通常為40次，每次循環(huán)后收集熒光信號。
熒光信號檢測：在60℃退火階段收集FAM通道的熒光信號，實時監(jiān)控擴增過程。
5. 數(shù)據(jù)分析
定量分析：
繪制標準曲線：以陽性對照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算待測樣品的DNA濃度。
根據(jù)待測樣品的Ct值推算其濃度。
定性分析：
陰性對照無Ct值或Ct值≥40，陽性對照有典型擴增曲線且Ct值<40，待測樣品根據(jù)Ct值判斷陽性或陰性。
6. 結(jié)果驗證
必要時進行驗證實驗：如凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物大小，確保實驗結(jié)果的可靠性。
注意事項
實驗環(huán)境：實驗應(yīng)在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進行，避免污染。
個人防護：佩戴一次性手套、口罩和無塵工作服，避免直接接觸試劑。
試劑保存：所有試劑需避光保存，避免反復(fù)凍融。
廢棄物處理：實驗后廢棄物需無害化處理
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