多功能氧化酶（(mixed function oxidase，MFO）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應，可使原化學物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應，可使原化學物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì)，導致毒性增強，成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學物質(zhì)相互作用的深入研究，對于從分子生物學水平上進一步了解外源性化學物質(zhì)的毒作用具有重要意義。

測定原理：

MFO 催化對硝基苯甲醚產(chǎn)生對硝基ben酚，在 400nm 下有特征吸光值。

多功能氧化酶試劑盒   抗氧系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×3 管，-20℃保存；臨用前取一管加入 2ml 水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

自備儀器和用品：

分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液（ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在 10ml 管中依次加入如下試劑

分別加入 2.5ml 氯仿，充分混勻萃取，靜置 10min，取下層氯仿層 1.5ml 至新的管中。再加入試劑四 1.5ml，充分混勻萃取，取上層水相 1ml 于 1ml 玻璃比色皿中，400nm 下測定吸光值A 測定與A 空白，△A=A 測定-A 空白?？瞻坠苤恍铚y一管。

MFO 活性計算:

標準曲線：y = 0.0238x + 0.0021，R² = 0.9997；y，吸光度；x,標準品濃度，單位nmol/ml。

（1） 按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g 樣本每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0021）÷0.0238×V 總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=4.2×（△A-0.0021）÷W

（2） 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0021）÷0.0238×V 總÷(V 樣×Cpr)÷T

=4.2×（△A-0.0021）÷Cpr

V 總：最終萃取液體積，1.5 ml；V 樣：反應中樣品體積，500μl；T：反應時間，30min；W：樣品質(zhì)量，

g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml。

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