PAX Blood miRNA Kit

(For PAXgene Blood RNA Tube)

PAX Blood microRNA Kit 核酸提取

目錄號：91511

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介：

PAX Blood miRNA Kit設(shè)計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。

從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。

產(chǎn)品特點

配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA

Kit Contents and Storage

注意：

蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復溶。在 –20 °C 下儲存。 避免反復凍融。所有試劑在zhi定溫度下儲存時，可穩(wěn)定保存 9 個月。

描述：

PAX Blood miRNA Kit設(shè)計用于從儲存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應(yīng)用。

從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。

用戶提供的材料和設(shè)備：

1. 微量離心機的離心能力為 13,000 x g

2. 100% 異丙醇

3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭

4. 不含 RNase 的水

5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管

6. 搖動培養(yǎng)箱或加熱塊，溫度可達 55°C、65°C

7. 帶水平轉(zhuǎn)子的離心機，離心力可達 5,500 x g

注意：

?shou次使用前，將規(guī)定量的乙醇加入 Wash 中溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶，充分混合，并在瓶子上做標記用支票。

? 將培養(yǎng)箱或加熱塊加熱至 55°C。

1. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘。

2. 吸出并丟棄上清液。

3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水。渦旋以wan全重懸沉淀。

4. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。

5. 吸出并丟棄上清液。

注意：不wan全去除上清液會降低裂解效率并稀釋裂解物，從而降低 RNA 產(chǎn)量。

6. 加入 350 μl 重懸緩沖液。渦旋以wan全重懸沉淀。

7. 將樣品轉(zhuǎn)移到新的 1.5 ml 微量離心管中。

8. 加入 300 μL 結(jié)合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液。渦旋 5 秒鐘以充分混合。

9. 使用振蕩培養(yǎng)箱在 55°C 下孵育 10 分鐘。

10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次，或使用電子組織勻漿器勻漿。此步驟剪切基因組 DNA，降低裂解物的粘度，提高產(chǎn)量。

11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
     12. 加入等體積的 100% 異丙醇。渦旋充分混合。

13. 將最多 700 μl 混合物轉(zhuǎn)移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結(jié)合柱中。

14. 以最大速度離心 1 分鐘。

15. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。

16.重復步驟 13-15，直到剩余樣品轉(zhuǎn)移到 RNA 結(jié)合柱中。

17. 加入 350 μl 洗滌液 1.

18. 以最大速度離心 1 分鐘。

19. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。

20. 對于每個 RNA 結(jié)合柱，準備 DNase I 消化

reaction mix as follows:

重要提示：

• DNase I 對物理降解非常敏感，易受到影響。請勿對 DNase I 混合物進行漩渦混合。請通過翻轉(zhuǎn)試管輕柔混合。

• 請在 RNA 分離之前新鮮準備 DNase I 儲備溶液。

• 標準 DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會影響 RNA 與基質(zhì)的結(jié)合，并可能減少 RNA 的產(chǎn)量和純度。

• 所有步驟必須在室溫下進行。請快速但小心操作。21. 將 50 μl DNase I 消化反應(yīng)混合物直接吸取到 RNA 結(jié)合柱的中心表面上。

注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到
膜。如果一些混合物保留在 RNA 結(jié)合柱的壁或 O 形圈上，則 DNase I 消化將不wan全
22. 在室溫下靜置 15 分鐘。
23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘。
24. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3。以最大速度離心 1 分鐘。
26. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
27. 重復步驟 25-26 進行第二個洗滌液 2/3 洗滌步驟。
28. 以最大速度離心空的 RNA 結(jié)合柱 2 分鐘，以干燥柱基質(zhì)。

注意：洗脫前干燥柱膜很重要。
殘留的乙醇可能會干擾下游應(yīng)用。
29. 將 RNA 結(jié)合柱轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 微量離心管中。
30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預熱至 70–90°C 將增加 RNA 產(chǎn)量）。在室溫下靜置 1 分鐘。
31. 以最大速度離心 2 分鐘。

PAX Blood microRNA Kit 核酸提取