Universal DNA Purification Kit

通用型 DNA 純化回收試劑盒

通用型DNA純化回收試劑盒 核酸提取

目錄號(hào):43013

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

無(wú)水乙chun

保存條件：

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒既能從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化 PCR 產(chǎn)物，還適用于mei切產(chǎn)物 DNA 片段的純化回收、探針標(biāo)記后的純化回收、DNA 樣本濃縮。使用本產(chǎn)品可回收 100bp-10kb 大小的DNA 片段，回收率可達(dá) 85%-95%。該試劑盒操作簡(jiǎn)便，得到的 DNA 片段可用于mei切、連接、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1.   Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫潮濕或其他不良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響。收到貨后 2 個(gè)月內(nèi)，不用做柱平衡。

2.   使用前請(qǐng)先檢查Buffer BL、Buffer DB 是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

3.    切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì) DNA 造成損傷。

4.    回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。

操作步驟：

第一次使用前，請(qǐng)先在 Buffer WB 中加入無(wú)水乙chun，并打?qū)礃?biāo)記，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

一、從瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）

2.    切膠：在長(zhǎng)波紫外燈下，用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠。

3.    稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠，放入 1.5 ml 離心管中，稱取凝膠重量（去除空管重量）。如果凝膠重量為 100mg，其體積可視為 100ul。

4.    溶膠：加入 3 倍體積 Buffer DB，56℃水浴，直到凝膠wan全溶解，期間顛倒混勻 2 次加速溶膠。

（如果凝膠濃度大于 2%，應(yīng)加入 6 倍體積 Buffer DB。對(duì)于回收<100 bp 的小片段，可在凝膠wan全溶解后，再加入 1.5 倍膠塊體積的異丙chun以提高回收率。）

5.   吸附：待溶液冷卻至室溫后加入吸附柱中，室溫靜置 1 min，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（如果總體積超過(guò) 750 ul，可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中）

6.    漂洗：加入 600 ul 漂洗液Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

7.    二次漂洗：重復(fù)操作步驟 6。

8.    干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙chun，防止其抑制下游反應(yīng)。

9.   回收：將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 65℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

二、 從 PCR 反應(yīng)液或mei切反應(yīng)液中回收 DNA 片段

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul 平衡液Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）

2.   加結(jié)合液：估計(jì)PCR 反應(yīng)液或mei切反應(yīng)液的體積，向其中加入 5 倍體積溶液 Buffer DB，充分混勻。

（如果樣本體積小于 100ul,用滅菌水補(bǔ)齊 100ul,以提高回收效率。）

3.   吸附：將上一步所得溶液加入一套吸附柱中，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（ 注意：吸附柱容積為 750ul，若樣品體積大于 750ul 可分批加入）

4.    漂洗：加入 600ul Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

5.    二次漂洗：重復(fù)操作步驟 4。

6.   干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙chun，防止其抑制下游反應(yīng)。

7.   洗脫：將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

通用型DNA純化回收試劑盒 核酸提取