ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）空白孔的設(shè)置是ELISA實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，旨在通過設(shè)立空白對照來減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。以下是關(guān)于ELISA空白孔設(shè)置的詳細(xì)分析。
一、空白孔的種類及設(shè)置目的
1.空氣空白/水空白：主要用于儀器調(diào)零。在實(shí)驗(yàn)中，所有孔的數(shù)值都會(huì)減去這個(gè)空白孔的數(shù)值，以消除儀器背景噪聲的影響。
2.底物空白：用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高。這種空白孔只加入底物和終止液，不加入其他任何試劑。在數(shù)據(jù)處理時(shí)，同樣需要將所有孔的數(shù)值減去這個(gè)空白孔的數(shù)值。
3.酶空白：一般在兩步法實(shí)驗(yàn)中使用，用于觀察酶是否與板有非特異性結(jié)合。不過，這種空白孔的設(shè)置并不是必需的，通常根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體需求來決定是否設(shè)置。
二、空白孔的設(shè)置數(shù)量
ELISA空白孔一般設(shè)置一個(gè)，這是為了減除顯色液的OD值（光密度值），從而得到更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。需要注意的是，雖然設(shè)置一個(gè)空白孔已經(jīng)足夠，但在實(shí)際操作中，為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性和重復(fù)性，有時(shí)會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣或?qū)嶒?yàn)要求設(shè)置更多的空白孔。
三、空白孔中添加的內(nèi)容
1.什么都不加：這種做法的根據(jù)是“空白"即什么都沒有。按照正常的操作流程處理這個(gè)孔，最后得到的數(shù)值即為空白值。
2.加樣本稀釋液：這種做法的根據(jù)是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的。加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽性物質(zhì)這一點(diǎn)外，其他的都與其他孔保持一致。這樣做可以進(jìn)一步減少實(shí)驗(yàn)誤差。
四、設(shè)置空白孔時(shí)的注意事項(xiàng)
1.確?？瞻卓椎那鍧崳涸谠O(shè)置空白孔時(shí)，要確保其不被污染。任何污染都可能導(dǎo)致空白值偏高，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2.正確的操作流程：空白孔需要按照正常的操作流程進(jìn)行處理，包括洗滌、加試劑等步驟。這樣才能確?？瞻字档臏?zhǔn)確性和可靠性。
3.合理的數(shù)據(jù)處理：在數(shù)據(jù)處理時(shí)，需要正確地將所有孔的數(shù)值減去空白孔的數(shù)值。這樣才能得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
綜上所述，ELISA空白孔的設(shè)置是ELISA實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過合理設(shè)置空白孔并遵循正確的操作流程和數(shù)據(jù)處理方法，可以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。
