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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒適用于檢測(cè)的牛的組織樣品、鼻-拭子等標(biāo)本中牛病毒性腹瀉病毒核酸，適用于牛病毒性腹瀉病毒感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到極微量的牛病毒性腹瀉病毒核酸，不放過(guò)任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過(guò)多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證，適用于組織樣品、鼻-拭子 等多種常見樣本，滿足不同的檢測(cè)需求。

五、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，在您購(gòu)買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購(gòu)買后為您解決使用過(guò)程中遇到的任何問(wèn)題，讓您無(wú)后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

組織樣品：用無(wú)菌剪刀、鑷子采集待檢臟器或組織?？刹杉c粘膜刮取物或肺、脾、淋巴結(jié)等作為待檢組織樣品；對(duì)流產(chǎn)胎牛、死胎，直接采集胎兒的組織；對(duì)懷疑死于粘膜病的牛，可采集血-塊或肺、脾、淋巴結(jié)等組織，尤其是腸道集合淋巴組織，如腸道樣品已發(fā)生自溶，可采扁桃體和淋巴結(jié)。將采集的樣品裝入無(wú)菌采樣袋或其他滅菌容器，編號(hào)備用；鼻-拭子：對(duì)疑似為急性感染期或持續(xù)感染的牛，采集鼻分泌物拭子。取鼻-拭子時(shí)將拭子深入鼻腔來(lái)回擦拭 2 次~3 次并旋轉(zhuǎn)，取分泌物；將采樣后的拭子放入盛有 2.0 mL PBS 的采樣管中，編號(hào)備用。

其它樣本采集請(qǐng)參考 GB/T 18637-2018 《牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術(shù)規(guī)范》。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過(guò) 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：用無(wú)菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品 2.0g 于研缽或組織勻漿器中充分研磨，再加 10.0mLPBS 混勻， 

2000r/min 離心 5 min 后，取 1.0ml 上清液轉(zhuǎn)入無(wú)菌 1.5mL 滅菌離心管中，編號(hào)備用。

鼻-拭子：用含 1000U/mL 青-霉素和鏈-霉素的細(xì)胞培養(yǎng)液 4 倍稀釋后，2000r/min 離心 15min 取上清液，編號(hào)備用。

其他樣本前處理請(qǐng)參考 GB/T 18637-2018 《牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術(shù)規(guī)范》。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取試劑（離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書進(jìn)    行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿

10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑BVDV 反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無(wú) Ct 值。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過(guò)程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

3.陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！