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天津市蘭博實驗儀器設(shè)備有限公司

液相色譜結(jié)合蘭博柱后衍生系統(tǒng) 測定維生素B1

時間:2015-1-29 閱讀:770
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液相色譜柱后衍生法測定維生素B1

維生素B1又稱硫胺素,是人體生長和發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì),在食品和保健品中廣泛應(yīng)用,因此如何快速準確的測定就顯得非常重要。維生素B1經(jīng)氧化后,與鐵KCN 在堿性條件下可以生成有熒光的物質(zhì)。本方法以此為依據(jù),建立了液相色譜-柱后衍生法測定維生素B1。

1 材料和方法

1.1試劑

維生素B1標準品,購自Sigma公司;無水醋酸鈉,冰醋酸,氫氧化鉀,水為屈臣氏蒸餾水,甲醇為色譜純。

0.05 mol/L醋酸鈉溶液(pH = 4.5):稱取醋酸鈉4.10 g加水溶解,并用冰乙酸調(diào)節(jié)pH = 4.5,然后稀釋至1000 ml

0.25 g/L堿性鐵KCN溶液(吸取10 g/L鐵KCN溶液5 ml100 g/L的氫氧化鉀溶液稀釋至500 ml)。

1.2儀器

分析型液相色譜儀(HPLC),由AS3000自動進樣器,Lablliance Series 高壓泵,天津蘭博第三代 PCR3柱后衍生裝置,Varian9075熒光檢測器和Lablliance色譜工作站組成,配一支Kromasil C18色譜柱(4.6 x 250 mm, 5 um);AXM-8 Temp.柱溫箱

1.3色譜條件

色譜柱:Kromasil C18色譜柱(4.6 x 250 mm, 5 um),天津蘭博實驗儀器有限公司;

流動相:0.05 mol/L醋酸鈉溶液(pH=4.5/甲醇=95/5

流速:1.0 ml/min;

柱溫:室溫;

進樣量:10 ul;

衍生劑:0.25 g/L堿性鐵KCN溶液;

流速:0.3 ml/min;

衍生溫度:室溫;

檢測波長:激發(fā)波長375 nm,發(fā)射波長435 nm

2 試驗結(jié)果

2.1 流動相的選擇

根據(jù)維生素B1的性質(zhì),優(yōu)化流動相配比,選擇0.05 mol/L醋酸鈉溶液(pH=4.5/甲醇=95/5為流動相,標準品色譜圖1所示。

 

2.2線性關(guān)系考察

稱取0.0500g 的維生素B1標準品,用蒸餾水溶解并定容至100 ml,放于冰箱中備用。測定時將儲備液稀釋至濃度為10.0 ug/ml,過0.45um濾膜,配制標準系列濃度為0.01、0.050.10、0.20、1.0、10.0 ug/ml。

結(jié)果表明在0.0110.0 ug/ml濃度范圍內(nèi),以進樣濃度為橫坐標,出峰面積為縱坐標繪制標準曲線,得到線性回歸方程Y=7.46×106X,r=0.9998,維生素B1有良好的線性關(guān)系。

2.3重現(xiàn)性考察

精密吸取濃度為0.05 ug/ml標準品溶液10 uL,進液相色譜儀測定,重復(fù)進樣5次,記錄峰面積,計算峰面積標準偏差,得維生素B1RSD=1.8%

3結(jié)論

本方法具有方便、準確、靈敏度高、精密度好等優(yōu)點,且線性范圍寬, 重現(xiàn)性好,可以滿足日常分析需要。



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