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采用PCR或等溫擴增的方法來擴增DNA(或RNA)時,反應溫度在50℃以上,反應體積介于10-100ul之間,并且可能需要在樣品上覆蓋一層油性物質(zhì)或采取相似的封閉操作。這是因為,在反應的過程中伴隨的蒸發(fā)現(xiàn)象致使反應體積不可過小,另一方面,較大的反應體積會消耗更多的耗材,并且在循環(huán)擴增過程中無法有效的進行溫度控制(達到預定的溫度需要較長的時間)。TwistDx’s提出的重組酶聚合酶擴增(RPA)技術對這一難題給出了解決方案。重組酶聚合酶擴增反應可在低溫(通常在37-42℃,可以在更低溫度下進行)下
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一、pH的定義溶液的酸堿性可用[H+]或[OH-]來表示,習慣上常用[H+]來表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。對于很稀的溶液,用[H+]來表示溶液的酸堿性往往既有小數(shù)又有負指數(shù),使用不方便,因此常用pH值來表示溶液的酸堿性。pH值是指氫離子濃度的負對數(shù),即pH=一lg[H+]例如:[H+]=10一7mol/L,pH=7;[H+]=10一9mol/L,pH=9;[H+]=10一3mol/L,Ph=3。pH值的使用范圍一般在0~14之間。pH值越小,溶液的酸性越強,堿性越弱;pH值越
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采用CRISPR/Cas9介導敲入技術構建可量化生產(chǎn)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定細胞系從植物標本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進,已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學家RafalM.Gutaker等將這些改進方法應用到植物標本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進行準確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長
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PCR反應的特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。一、標本交叉污染源:收集標本的容器:標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;吸樣槍:標本核酸模板在提取過程中,由于污染導致標本間污染;氣溶膠:zui可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式。在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝,因而由其造成的
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從植物標本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進,已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學家RafalM.Gutaker等將這些改進方法應用到植物標本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進行準確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長度減少35%,改進DNA與硅膜的結合條件可以額外減少10%。他們并未觀
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TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴增和DNA熔解分析含TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應用于突變檢測,可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低,在一個封閉的離心管中進行,可zui大限度的減少反應時間,減輕工作量,以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規(guī)測序更加靈敏(兩者的突變檢測閾值分別為~5%和15%~20%),但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術,如焦磷酸測序和微滴型數(shù)字PCR而言,其靈敏度相差甚遠。IrinaV.Botezatu等科學家證明,在
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一、化學分類:1.天然培養(yǎng)基,指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。2.組合培養(yǎng)基,又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,是一類按微生物的營養(yǎng)要求設計后用多種高純化學試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。3.半組合培養(yǎng)基,指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。二、物理分類:1.固體培養(yǎng)基,一類外觀呈固態(tài)的培養(yǎng)基。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。2.液體培養(yǎng)基,一類呈液態(tài)的培養(yǎng)基。3
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分層細胞膜微區(qū)調(diào)節(jié)細胞因子信號傳導從而影響受體二聚體的穩(wěn)定性
信號分子復合物動力學的結果顯示,信號分子復合物是調(diào)控細胞免疫特異性的關鍵。ChangjiangYou等科學家提出了一種實驗結合計算的研究方法,通過對細胞膜微區(qū)測量結果的量化構建了I型干擾素受體復合物動力學。通過長期的雙色量子點(QD)示蹤,他們發(fā)現(xiàn)單個由配體誘導產(chǎn)生的受體異源二聚體的壽命取決于細胞膜骨架(MSK)的完整性,這一點被證明對有效的下游信號也是至關重要的。通過成對關聯(lián)示蹤,定位顯微鏡以及快速量子點示蹤,識別了一個在300nm范圍內(nèi)的第二限制?;趯嶒灁?shù)據(jù),將一個定量空間隨機擴散反應模型