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詳細介紹
(R)-BiAC法（手性氨基酸LC/MS分析）
D/L-氨基酸（手性氨基酸）LC/MS 分析用衍生試劑
氨基酸是廣泛存在于生物體內和自然界中的化合物。它存在著兩種對映異構體，即L-氨基酸和D-氨基酸，主要以L-氨基酸的形式存在。近年研究表明，微量存在的D-氨基酸與記憶、學習能力等方面有關1），因此D-氨基酸與L-氨基酸的分離分析變得越發(fā)重要。
（R）-BiAC是一種衍生化試劑，可用于柱前衍生化法對D/L-氨基酸（手性氨基酸）進行LC/MS分析。使用(R)-BiAC試劑時無需專用設備即可進行用時短（19 min）、分辨率高的手性氨基酸分析。
1）Hashimoto, A., Oka, T.: Prog. Neurobiol., 52, 325 (1997).
◆特點
無需專用設備，即可使用LC/MS檢測手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）！
使用（R）-BiAC進行柱前衍生化，無需專用設備，使用LC/MS即可檢測手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
約19 min即可實現(xiàn)20種D/L氨基酸的同時分析！
可短時間內同時分析多種手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
可實現(xiàn)手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）的高靈敏度檢測！
可提高MS的電離效率，還能以atto mol水平的靈敏度檢測手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
可提供衍生化專用試劑套裝！
使用已制備的(R)-BiAC 衍生試劑套裝即可更輕松地進行衍生化操作。
◆使用(R)-BiAC 衍生試劑套裝的衍生化步驟
(R)-BiAC 衍生試劑套裝組成
產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 數(shù)量 |
293-86011 | (R)-BiAC用緩沖液 | 3 mL | 1 |
290-86021 | 反應終止劑 | 10 mL | 1 |
除（R)-BiAC 衍生試劑套裝外所需試劑
產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 |
012-19851 | 乙腈 | LC/MS用 |
025-19761 | (R)-BiAC | 氨基酸分析用 |
235-64051 | Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D) | - |
試劑的制備方法
1、R)-BiAC試劑溶液
使用1-2 mL乙腈沖洗1整瓶（5 mg）(R)-BiAC，轉移到其他容器后，加入乙腈使總體積達到5 mL，混合并充分溶解※
※ 將已制備的溶液按需分裝后冷凍保存。需盡快使用（-20°C 下可存儲約1周），并避免反復凍融。
2、(R)-BiAC用緩沖溶液—乙腈溶液
向(R)-BiAC用緩沖溶液的容器中添加3 mL的乙腈溶液
衍生化
◆人尿液中手性氨基酸的分析示例※
前處理條件
1、20 µL樣品/標準溶液 + 20 µL內標溶液 + 40 µL乙腈
2、攪拌
3、離心（20,000 x g，10 min）
↓
收集上清液 20 µL
↓
衍生化
13種手性氨基酸的分析示例（色譜柱：Wakopak® Ultra APDS TAG®）
LC/MS/MS 色譜圖 （標準溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））
LC/MS/MS 色譜圖（人尿液樣品）
成分名 | 檢測離子 (m/z) | 成分名 | 檢測離子 (m/z) | 成分名 | 檢測離子(m/z) | |||
母離子 | 子離子 | 母離子 | 子離子 | 母離子 | 子離子 | |||
D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
【設備】
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
【HPLC】
色譜柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
柱溫：40℃
流動相：A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
梯度：
| Time (min.) | B conc. (%) |
| 0-3 | 14-16 |
| 3-14.3 | 16-33 |
| 14.3-17 | 33-45 |
| 17-17.1 | 45-90 |
| 17.1-18 | 90 |
| 18-18.1 | 90-14 |
| 18.1-20 | 14 |
【MS】
電離：ESI
模式：SRM
◆乳酸飲料中手性氨基酸的分析示例※
前處理條件
1、20 µL樣品/標準溶液 + 20 µL內標溶液 + 40 µL乙腈
2、攪拌
3、離心（20,000 x g，10 min）
↓
收集上清液 20 µL
↓
衍生化
13種手性氨基酸的分析示例（色譜柱：Wakopak® Ultra APDS TAG®）
LC/MS/MS 色譜圖 （標準溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））
LC/MS/MS 色譜圖（乳酸菌飲料樣品）
| 成分名 | 檢測離子 (m/z) | 成分名 | 檢測離子 (m/z) | 成分名 | 檢測離子(m/z) | |||
| 母離子 | 子離子 | 母離子 | 子離子 | 母離子 | 子離子 | |||
| D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
| L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
| D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
| L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
| D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
| L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
| Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
| D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
| L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
| D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
【設備】
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
【HPLC】
色譜柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
柱溫：40℃
流動相：A）0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq.，B） 95% CH3CN in H2O
梯度：
Time (min.) | B conc. (%) |
0-3 | 14-16 |
3-14.3 | 16-33 |
14.3-17 | 33-45 |
17-17.1 | 45-90 |
17.1-18 | 90 |
18-18.1 | 90-14 |
18.1-20 | 14 |
【MS】
電離：ESI
模式：SRM
※ 本數(shù)據(jù)為分析示例，離子源參數(shù)和其他參數(shù)可能因所用設備而異。
◆產品列表
衍生化試劑
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 產品等級 |
| 025-19761 | (R)-BiAC | 5 mg | 氨基酸分析用 |
| 296-86001 | (R)-BiAC衍生化試劑套裝 | 1 kit | 氨基酸分析用 |
| 012-19851 | Acetonitrile 乙腈 | 1 L | LC/MS用 |
| 018-19853 | 3 L | LC/MS用 |
HPLC色譜柱
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 |
| 235-64051 | Wakopak(R) Ultra APDS TAG(R) φ2.1mm × 100mm (D) | 1 EA |
標準溶液
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 產品等級 |
| 015-27891 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN[CRM] 氨基酸混合標準溶液, AN型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 011-27871 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B[CRM] 氨基酸混合標準溶液, B型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 018-27881 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H[CRM] 氨基酸混合標準溶液, H型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 017-27851 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No1[CRM] APDS Tag® Wako用 氨基酸混合標準溶液No1[CRM] | 2 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 014-27861 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No.2[CRM] APDS Tag® Wako用 氨基酸混合標準溶液No.2[CRM] | 2 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 016-28161 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN(High Range) 氨基酸混合標準溶液，AN型（高濃度） | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 010-28164 | 5 mL | 氨基酸自動分析用 | |
| 012-28141 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B(High Range) 氨基酸混合標準溶液，B型（高濃度） | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 016-28144 | 5 mL | 氨基酸自動分析用 | |
| 019-28151 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H(High Range) 氨基酸混合標準溶液，H型（高濃度） | 1 mL×5A | 氨基酸自動分析用 |
| 013-28154 | 5 mL | 氨基酸自動分析用 |
內標混合液
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 產品等級 |
| 293-73701 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution APDS Tag® Wako用氨基酸內標混合溶液No1[CRM] | 1 set | 氨基酸自動分析用 |
參考文獻
1）Harada, M. and Karakawa, S. et al.: J. Chromatogr. A, 1593, 91 (2019).
2）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Wako Junyaku Jiho, 87 (1), 5 (2019).
3）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Symmetry, 12, 913 (2020).
關于富士膠片和光
日本富士膠片和光純藥株式會社（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）供應產品超過5萬種，涵蓋合成與材料、分析、培養(yǎng)、生命科學、藥品生產與品質管理等應用，囊括了基礎研究至關乎人類健康的生命科學研究領域。本社成立于1922年，前身為前武田藥品工業(yè)株式會社，2017年被富士膠片集團全面收購。
隨著富士膠片集團對生命科學領域的更大重視和投入，為了繼續(xù)對中國客戶提供更多前沿、品質可靠的產品，富士膠片和光純藥株式會社在中國設立了子公司富士膠片和光（廣州）貿易有限公司，是一家試劑、耗材和儀器的綜合供應商。除了富士膠片和光品牌產品，本公司還代理Enzo Life Sciences、VLVbio、imed、AdipoGen、Stemgent、Cosmo Bio、ReproCell、Funakoshi、Kikkoman、Sanplatec、SONSAN、Genovis、Albumedix、Indigo等國內外品牌，在學術研究、產業(yè)化、醫(yī)療等大范圍領域作出貢獻。
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