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胱天蛋白酶1(CASP1)活性蛋白

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2023-03-22 22:22:21瀏覽次數:453次

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供貨周期 現貨 應用領域 化工,生物產業(yè)
主要用途 僅供科研研究實驗 英文名稱 Active Caspase 1 (CASP1)
物種 Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 規(guī)格 10μg50μg200μg1mg5mg
品牌 研生
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公司產品僅供科研使用,不得用于臨床!

產品名稱

英文名稱

物種

胱天蛋白酶1(CASP1)活性蛋白

Active Caspase 1 (CASP1)

Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

商品介紹:

ICE; IL1BC; IL1-BC; P45; Interleukin 1 Beta Converting Enzyme; Apoptosis-Related Cysteine Peptidase; Interleukin-1 beta convertase

信號轉導

酶與激酶

細胞凋亡

感染免疫

物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)

性狀:凍干粉

純度:> 95%

等電點:7.7

應用:Cellculture;ActivityAssays.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg   

蛋白表達及純化:

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。

3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

圖片5.png

圖片1.png


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注意事項:

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作                                            

操作步驟:

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數分鐘待用。

2.  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;

3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,4℃離心5 min;

4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);

5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液;

2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次;

3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數分鐘待用。

4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

細胞數量

Lysis Buffer加入量

107個

0.5 mL~1 mL

5×106個

0.2 mL~0.5 mL

5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;

6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);

7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

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