RACE技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理

      RACE技術(shù)是采用PCR 技術(shù)由已知的部分cDNA 順序來擴(kuò)增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。

3'RACE

利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.然后用一個(gè)基因特異引物GSP1（gene specific primer，GSP）作為上游引物，用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為下游引物，以cDNA*鏈為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因3' 末端的基因片

段擴(kuò)增出來。

5'RACE

先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，以O(shè)ligo（dT）30MN作為鎖定引物在反轉(zhuǎn)錄酶MMLV作用下，反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.利用該反轉(zhuǎn)錄酶具有的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在反轉(zhuǎn)錄達(dá)到*鏈的5'末端時(shí)自動(dòng)加上3-5個(gè)（dC）殘基，退火后（dC）殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接頭引物配對(duì)后，轉(zhuǎn)換為以SMART序列為模板繼續(xù)延伸而連上通用接頭（見Figure 2 ）。然后用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為上游引物，用一個(gè)基因特異引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作為下游引物，以SMART*鏈cDNA為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因5'末端的c基因 片段擴(kuò)增出來。終，從2個(gè)有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA，或者通過分析RACE產(chǎn)物的3'和5'端序列，合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長cDNA。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、總RNA提取以及cDNA反轉(zhuǎn)錄

2、根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)引物，以cDNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，驗(yàn)證序列正確性

3、RACE 擴(kuò)增，并測(cè)序，使用錨定PCR（AnchoredPCR）與巢式PCR（Nested PCR）相結(jié)合的方法，分別進(jìn)行3'末端和5'末端RACE并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序

4、根據(jù)測(cè)序結(jié)果拼接目的基因全長cDNA序列

5、將RACE產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆用于后續(xù)研究（可根據(jù)客戶要求自行選擇）

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

采用進(jìn)口試劑,確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性

較同類產(chǎn)品方法更快速，便捷

豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，超過500例的成功案例

提供全套的后續(xù)生物信息學(xué)分析服務(wù)（可根據(jù)客戶要求提供個(gè)性化分析服務(wù)）

服務(wù)流程

1、確認(rèn)客戶提供的序列信息

2、評(píng)估RACE實(shí)驗(yàn)可行性

3、確認(rèn)樣本信息

4、根據(jù)客戶提供的信息設(shè)計(jì)好實(shí)驗(yàn)方案，銷售做出報(bào)價(jià)合同

4、客戶確定無誤后簽訂《沃森生物-RACE檢測(cè)服務(wù)合同》，并簽字（或蓋章）

5、支付預(yù)付款，服務(wù)正式啟動(dòng)

6、根據(jù)合同實(shí)驗(yàn)方案開展實(shí)驗(yàn)

8、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，發(fā)送初步實(shí)驗(yàn)報(bào)告

9、支付實(shí)驗(yàn)尾款

10、提供詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，完成實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

材料提交說明

實(shí)驗(yàn)樣品

1、組織或者細(xì)胞：提供盡可能多的新鮮組織或細(xì)胞樣品(包括3個(gè)技術(shù)重復(fù))，組織樣品不少于200 mg，細(xì)胞至少107個(gè)

2、RNA樣品：3’ RACE：Total RNA>15μg；5’ RACE：Total RNA>25μg（注：OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好)

序列信息：

1、大于200bp的已知序列(請(qǐng)注明已知序列的5’ 端及3’ 端)：如果已知序列比較短，建議先進(jìn)行3’ RACE再進(jìn)行5’ RACE，以提高實(shí)驗(yàn)的成功率

2、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考文獻(xiàn)：這將會(huì)幫助我們更好地理解您的實(shí)驗(yàn)背景，有利于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行

結(jié)果交付

實(shí)驗(yàn)結(jié)題報(bào)告：包括實(shí)驗(yàn)步驟，引物信息，實(shí)驗(yàn)過程 PCR產(chǎn)物照片，全長序列拼接結(jié)果；

測(cè)序原始數(shù)據(jù)：測(cè)序彩色波形圖、堿基序列圖；

實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物：引物、PCR產(chǎn)物、測(cè)序用質(zhì)粒（限產(chǎn)生克隆測(cè)序的情況）。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作，秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值，為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想，為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富"的經(jīng)營理念，堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。