NEB 10-beta 大腸桿菌克隆感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC113-01
NEB 10-beta Competent cells 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的NEB 10-beta感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌NEB 10-beta菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)
胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg，-70℃保存6個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生
改變。
基因型：
araD139?(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80?(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR )?(mrr-hsdRMS
mcrBC)
產(chǎn)品特點(diǎn) ：
1. 大腸桿菌K12菌株背景，DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有抗性基因(StrR )。
2. 可轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒和BACs。
3. DNA重組缺陷(recA1)和內(nèi)切酶I缺陷(endA1)的特點(diǎn)有利于DNA克隆的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
4. 對(duì)T1噬菌體有抵抗能力（fhuA2）。
5. 無(wú)需添加IPTG，只加X-gal即可檢測(cè)β半乳糖苷酶活性，用于藍(lán)白斑篩選。
操作步驟（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）：
提示
?
感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
?
進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
?
為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用 DNA 體積
不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。)以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻 2 分鐘，該過(guò)程不要
搖動(dòng)離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進(jìn)行，時(shí)間不需十分準(zhǔn)確，夏季或室溫較高時(shí)，可放置
5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長(zhǎng)時(shí)間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）
4. 向每個(gè)離心管中加入 500μl 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床
振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5. 無(wú)菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無(wú)菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將
細(xì)胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。（涂布用量可根據(jù)具
體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)
化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。
相關(guān)試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的
去離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝
后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的
去離子水，溶解后再補(bǔ)加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。
加入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時(shí)加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此
種培養(yǎng)基稱為 SOB）。再補(bǔ)加經(jīng) 0.22µm 過(guò)濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。
3. 轉(zhuǎn)化復(fù)蘇細(xì)菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無(wú)菌狀態(tài)按
1ml每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大
地避免培養(yǎng)基污染和減少勞動(dòng)量。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
冷卻至 50℃左右時(shí)加入相應(yīng)濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細(xì)菌用的無(wú)
菌培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無(wú)菌
0.22μm過(guò)濾膜過(guò)濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。


南京萬(wàn)木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表，被國(guó)內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺(tái)使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國(guó)內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
品牌優(yōu)勢(shì)
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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬(wàn)余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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