TG1感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC120-01 BC120-02
TG1 100?l×10 100?l×20
pUC19 質(zhì)粒 5? 5?l
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品介紹：
TG1 菌株來源于大腸桿菌 K-12，生長速度快，主要用于噬菌體展示（Phage Display），也可進(jìn)行 M13 噬菌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，也可
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中，用手指管底，
用于普通質(zhì)粒的克隆構(gòu)建及提取。lacZΔM15 的存在可進(jìn)行α互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。由于該菌株不含核酸酶 endA1 突變，
提取的質(zhì)粒中核酸酶含量較高，需用去蛋白液處理。TG1 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成，經(jīng) pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá) 10 8cfu/μg
DNA。
基因型：supE thi-1 _(lac-proAB) _(mcrB-hsdSM)5(rK– mK–) [F′ traD36 proAB lacIqZ _M15]
菌株抗性：對氨芐、、、、、和四環(huán)素敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：（以氨芐抗性的 pUC19 質(zhì)粒為例）
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中，用手指管底輕輕混勻。
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動(dòng)。
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動(dòng)。
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng)。
5. 加入 500μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基。
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm，復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨芐抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更大的
單克隆菌落。）
注意事項(xiàng)：
1. 化凍的感受態(tài)細(xì)胞不能長時(shí)間放置，影響轉(zhuǎn)化效率；
2. 感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融；
3. 操作過程要輕柔，避免用移液槍反復(fù)吹打；
4. 整個(gè)轉(zhuǎn)化過程應(yīng)注意無菌操作，避免污染。


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