大鼠FⅤ酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（科研實驗專用）操作步驟：步驟一：使用前將所有試劑平衡至室溫并充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫以免加樣時加入大量的氣泡產(chǎn)生加樣上的誤差。步驟二：根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。步驟三：【加樣】加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物，素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37攝氏度溫育45分鐘。步驟四：【洗滌】甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液振蕩30秒，甩去洗滌液用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次，也可以用洗板機洗滌。步驟五：每孔加入100ul的HRP輕輕振蕩混勻37攝氏度溫育30分鐘。步驟六：重復(fù)洗滌步驟。步驟七：每孔加入底物A、B溶液各50ul，輕輕振蕩混勻，37攝氏度溫育5分鐘，避免光照。步驟八：取出酶標板迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。步驟九：在450nm波長處測定各孔的OD值。

備注：1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。2.標準品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 pg/ml3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

大鼠FⅤ酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被（FⅤ）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的（FⅤ）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

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