摘要：髓過氧化物酶(MPO)是一種過氧化物酶，由17號(hào)染色體上的MPO基因編碼。MPO在中性粒細(xì)胞（白血球的一種亞型）中表達(dá)得最多，并產(chǎn)生次氯酸以進(jìn)行抗菌活動(dòng)，包括次氯酸，其鈉鹽是漂白劑中的化學(xué)物質(zhì)。它是一種溶酶體蛋白，儲(chǔ)存在中性粒細(xì)胞的嗜氮顆粒中，并在脫顆粒時(shí)釋放到細(xì)胞外空間。150kDa的MPO蛋白是一個(gè)陽離子異四聚體，由兩條15kDa的輕鏈和兩條重量可變的糖基化重鏈組成，與一個(gè)修復(fù)性血紅素基團(tuán)結(jié)合，排列成異二聚體。

大鼠髓過氧化物酶(MPO)科研ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備：

1） 確定試劑盒在有效期內(nèi)

2） 仔細(xì)閱讀說明書，按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）

3） 提前準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需的設(shè)備（如離心機(jī)、37℃恒溫箱、高精度加樣器及槍頭、酶標(biāo)儀等）

4） 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者注意低溫保存。根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量

5） 按說明書將所有試劑平衡至室溫，配制所需試劑。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟。

注意：我司ELISA試劑盒中每個(gè)試劑都有穩(wěn)定體系的作用，請嚴(yán)格按照說明書操作

常見樣本處理及要求：大鼠髓過氧化物酶(MPO)科研ELISA試劑盒

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：收集血液樣本應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下，ELISA實(shí)驗(yàn)中將會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果），稱重后將組織jian碎。將jian碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【樣品保存】：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。