目錄:柏萊源（天津）生物科技有限公司>>生物試劑>>試劑盒kit>> HG-NA100血液/組織/細胞基因組 DNA 純化/提取試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100 人份 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
貨號： HG-NA100
本試劑盒用于核酸的提取、富集、純化等步驟，其處理后的產(chǎn)物可用于臨床體外檢測使用。
本試劑盒使用超順磁性微球可以特異性的吸附 DNA，通過洗滌去除 DNA 以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，分離純化得到高質(zhì)量核酸。
100 人份
| 序號 | 組分 | 規(guī)格 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 磁珠懸液 ①，50 mg/mL | 1 × 2 mL | |||
| 2 | 裂解液 ② | 1 × 25 mL | |||
| 3 | 洗滌液 I ③ | 1 × 60 mL | |||
| 4 | 洗脫液 ④ | 1 × 30 mL | |||
| 5 | 蛋白酶 K ⑤ | 1 × 20 mg | |||
| 6 | 溶液 A ⑥ | 1 × 1 mL |
2-8℃下有效期為 24 個月。
本試劑盒適用于 BIO-DL32, TIANGEN TGuide S32, TIAN LONG NP968 -C 等自動化核酸提取儀，也適用于手動提取。
新鮮或冷凍的抗凝處理的人全血樣品、組織及細胞。
首i次使用前：
（1）在洗滌液 I ③中緩慢加入指i定量（見瓶身標簽）的異丙醇（分析純，需客戶自備），并于“□"內(nèi)打上“√"，混勻后2~8℃保存。
（2）在蛋白酶 K 干粉 ⑤ 中加入指i定量（見管身標簽）的溶液 A ⑥，并于“□"內(nèi)打上“√"，混勻后保存于 2~8℃，或分裝后保存于 -20℃。
◆ 異丙醇（分析純）
◆ 漩渦振蕩器
◆ 80% 乙醇
◆ 垂直混合儀
◆ 1.5mL 離心管：2 個 / 樣品
◆ 恒溫金屬浴 (Dry Bath Incubator, Cat.:2016C) 或水浴鍋 (55℃ )
◆ 單通道移液器：20μL、200μL、1000μL
◆ 磁性分離器
取一個新的 1.5mL 離心管，加入 200μL 的抗凝血液樣品、組織或細胞（ 細胞取 1.0-1.5E6 cells 進行提?。?，具體可根據(jù)實驗調(diào)整（不足 200μL 時可用 PBS 或洗脫液④補足），再分別加入 10μL 的蛋白酶 K ⑤（檢查是否已加入溶液 A ⑥）和230μL 的裂解液②，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩 10s 后，置于 55℃條件下反應 5min。
加入 320μL 的異丙醇和 20μL 的磁珠懸液①，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩 10min（或漩渦震蕩 10s 后置于垂直混合儀上反應 10min）。快速離心 3s 后，然后將離心管置于磁性分離器上放置 2min，用移液器移去上清液并取下離心管。注意：此步驟的磁性分離時間應不少于 2 min。
① 加入 600μL 洗滌液 I ③（檢查是否已加入異丙醇），以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少 1min，使磁珠充分重懸，快速離心 3s 后，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。重復該步驟一次。
② 加入 600μL80% 乙醇，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少 1min，使磁珠充分重懸，快速離心 3s 后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。重復該步驟一次。
注意：最后一步洗滌應盡量除盡洗滌液。
保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置 10min 后，即磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。
注：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應管中有液體殘留時，可用小量程移液器吸棄液體。
加入 100~200μL 洗脫液④，渦旋震蕩，或用移液器緩慢吹打磁珠，使磁珠充分重懸。然后于 55℃條件下加熱 5min，快速離心 3s 后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的 1.5mL 離心管中，此即為純化得到的基因組DNA，可保存于 -20℃。
◆ 磁棒式自動化核酸提取儀（BIO-DL 32， TIANGEN TGuide S32， TIANLONG NP968 -C 等）
◆ 異丙醇（分析純）
◆ 80% 乙醇
◆ 96 孔磁棒套 2 個
◆ 1.5 mL 離心管：2 個 / 樣品
◆ 96 孔深孔板 1 個
◆ 單通道移液器：20μL、200μL、1000μL
（1）在 96 孔深孔板第 1 列和第 7 列依次加入 10μL 蛋白酶 K（檢查 是否已經(jīng)加入溶液 A），200μL 樣本，230μL 裂解液和 320μL 異丙醇 。
（2）在第 2 列和第 8 列加入 600μL 洗滌液 I（檢查是否已加入異丙醇）和 20μL 磁珠懸液。
（3）在第 3 列和第 9 列加入 600μL 洗滌液 I（檢查是否已加入異丙醇）。
（4）在第 4 列和第 10 列加入 600μL80% 乙醇。
（5）在第 5 列和第 11 列加入 600μL80% 乙醇。
（6）在第 6 列和第 12 列加入 100~200μL 洗脫液。
注意：第 1 列和第 7 列試劑加入時按照以下順序加入，先加入 10μL 蛋白酶 K，再加入 200μL 樣本，然后加入 230μL 裂解液，最后加入 320μL 異丙醇。（若試劑加入順序不對，可能導致核酸提取濃度及純度偏低。）
（7）自動化核酸提取儀提取參數(shù)設置建議：
| 步驟 | 名稱 | 槽位 | 等待時間(sec) | 混合時間(sec) | 磁吸時間(sec) | 吸磁模式 | 混合速度 | 體積 (μL) | 規(guī)格 (℃) |
| 1 | 吸磁珠 | 2 | 0 | 60 | 120 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
| 2 | 裂解 | 1 | 0 | 1200 | 180 | 循環(huán) | 快 | 760 | 75 |
| 3 | 洗滌1 | 2 | 0 | 120 | 100 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
| 4 | 洗滌2 | 3 | 0 | 120 | 100 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
| 5 | 洗滌3 | 4 | 0 | 120 | 30 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
| 6 | 洗滌4 | 5 | 0 | 120 | 30 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
| 7 | 洗脫 | 6 | 350 | 300 | 100 | 循環(huán) | 快 | 100 | 60 |
| 8 | 棄磁珠 | 2 | 0 | 60 | 0 | 循環(huán) | 快 | 600 | OFF |
注意：以上程序參數(shù)可根據(jù)實際情況進行適當調(diào)整。其中關鍵步驟為裂解步驟的混合時間、溫度，及洗滌步驟的混合時間，若提取效果不佳，可適當延長上述時間。
（8）自動化程序結(jié)束后，將第 6 及第 12 列的洗脫液分別轉(zhuǎn)移至新的離心管中，此即為純化得到的基因組 DNA，可保存于 -20℃。
1. 操作之前，請務必認真閱讀本產(chǎn)品手冊。
2. 血液樣品的質(zhì)量對產(chǎn)物 DNA 的純化量有較大影響，應避免反復凍融血液樣品。
3. 蛋白酶 K 干粉溶解后，可分裝儲存于 -20℃，但應避免反復凍融。
4. 應避免對磁珠進行冷凍、離心等操作。
5. 磁珠取用前應充分重懸均勻。
6. 磁珠干燥前，應使用移液器吸盡洗滌液。
7. 應避免磁珠過度干燥，否則會嚴重降低核酸洗脫效率。
8. 建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。
9. 在 96 孔板中進行磁性分離操作時，磁珠吸附時間可適當延長。
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